饑餓期糞腸球菌生物膜的形成及次氯酸鈉溶液對其作用研究

         饑餓期糞腸球菌生物膜形成及次氯酸鈉溶液對其作用研究,目的:體外建立對數期、穩定期、饑餓期的糞腸球菌生物膜模型,研究不同濃度的次氯酸鈉溶液對其作用效果。
方法:實驗一:糞腸球菌保種株活化制備成菌懸液,將菌懸液滴加到新鮮配制的TSB培養液中,分別在培養0h、2h、4h、6h、8h、10h、24h、48h、、72h、96h后,取100μl菌液于96孔無菌平底組織培養板中,用MTT分析法檢測不同時間點糞腸球菌的細菌活性,繪制糞腸球菌生長曲線。實驗二:在玻片上建立的對數期、穩定期、饑餓期的糞腸球菌生物膜模型。PBS緩沖液輕柔沖洗兩次,暗室下熒光染色15min后,濕潤狀態置于激光共聚焦顯微鏡下,觀察對數期、穩定期、饑餓期糞腸球菌生物膜的形態特點。實驗三:在24孔無菌平底組織培養板內,建立對數期、穩定期、饑餓期糞腸球菌生物膜模型,分別以1%、2.5%、5.25%次氯酸鈉溶液作用于各時期糞腸球菌生物膜表面,30s、5min、10min后終止藥物作用,以10倍連續稀釋法,對用藥前、后生物膜進行活菌計數,檢測其用藥后活菌降低量,并進行統計學分析。同時以共聚焦顯微鏡觀察各時期生物膜在藥物作用后,糞腸球菌生物膜樣本的表面變化。結果:實驗一:0-8h,糞腸球菌在充足的營養環境中細菌大量繁殖,具有高度的活性,呈對數期;8-24h,隨著培養時間的延長,細菌活性達到高水平并維持在相對恒定的狀態,為穩定期;48h后,隨著培養液中營養物質的消耗,細菌開始大量死亡,但仍有細菌存活并保持一定活性,為饑餓期。實驗二:共聚焦顯微鏡觀察顯示,糞腸球菌生物膜具有立體的空間結構、形態多樣,由死細菌和活細菌組成。饑餓期生物膜較其它兩時期生物膜細菌密度低。實驗三:次氯酸鈉溶液用藥后,各時期糞腸球菌生物膜中的活菌降低量,饑餓期低于穩定期,也低于對數期,結果具有統計學意義(p0.05)。
結論:1.糞腸球菌可以忍受饑餓條件,在低營養環境中保持活性,長期存活。2.饑餓期糞腸球菌具有形成生物膜的能力,生物膜形態不規則,表面活細菌較少,具有典型的三維立體結構。3.饑餓期糞腸球菌生物膜與對數期、穩定期相比,在相同藥物濃度、相同作用時間內對次氯酸鈉更具有耐藥性。相同作用時間內,5.25%次氯酸鈉溶液對饑餓期糞腸球菌生物膜的殺菌效果最佳;相同藥物濃度作用時,10min對饑餓期糞腸球菌生物膜的殺菌效果最佳。

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